我目前将以诱导好的E.coli 1c.c离心後加入300 micro liter binding bf 放入eppendorf中以超音波震破 打1sec停1sec 一次打一分 总共打3次 发现我要的蛋白在上清液中比其他蛋白多蛮多的 但是一但以其他版大提供的方法 200 C.C菌离心+3~4 C.C binding bf去打 1 sec / 1 sec 共五分 总共打五次 却发现我的主要要的蛋白在上清液中比其他蛋白少@@ 请问一下这是代表我要的蛋白被伤害到而沉淀所以变少了吗 ? 那请问大家是怎样破菌的条件? 我也试过100 c.c菌加入 10c.c binding bf 中打1 sec/ 1sec 7 min 觉得效果不是很好的样子 而且很像有很多离不下来的lipid会挡到protein跟Ni的 binding... 不知道有没有其他学长姐也曾碰过在在打少量确认蛋白是否可溶时 目标蛋白呈现 比其他蛋白多而在进行纯化破菌时目标蛋白却比其他杂蛋白少的问题.... 试了好久...纯化一直有杂蛋白..我猜有可能是因为破菌後目标蛋白较少 所以被其他蛋白挡住 导致再怎麽洗 目标蛋白仍不纯且少..是否有能人学长姐 能提供较好的破菌条件像是 时间浓度之类的..感激! --

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