作者bider (買沉木)
看板Biotech
標題Re: [求救]IP抓不到target protien
時間Sun Jul 27 21:24:32 2008
※ 引述《sisyphus (變形蟲)》之銘言：
: ※ 引述《bider (買沉木)》之銘言：
: : 小弟這幾天做IP
: : 用monoclonal anti-mouse的1抗
: : polyclonal anti-goat的2抗
: : 結果western出來結果很多雜band
: : 想請問有沒有前輩有類似經驗的可以解決@@
: : 按理來說
: : 不同的Fc應該不會有問題才對
: : 是因為polyclonal造成的嗎?
: 今天考完試剛好有時間來研究一下
: 首先你的antigen是mouse protein
: 1st ab 是goat anti mouse
: 2nd ab 是XX anti goat 這樣嗎?
應該這樣說
antigen用的 target protien Ab
他的2抗是 anti-mouse
W是用 rabbit anti-goat的2抗
是為了怕認到IP Ab 的heavy chain light chain才用不同2抗
: 根據我遙遠的記憶(不好意思我好久沒作了@"@)
: 通常都會寫抗體的的物種(吧?)
是的
但是由哪一種動物所做成的抗體應該沒有什麼差別吧@@
不是很懂^^
: 這樣可以很清楚的表達每個蛋白質的來源
: 這是不相干的事情
: 只是好奇一下
: IP或者其他免疫學方法會出問題通常都是一抗
: 因為二抗很容易就可以買到各式各樣很棒的抗體
: 然後就如同有人推文說的
: 一抗用polyclonal比較容易成功一點
但是
我們家的monoclonal是認nature form
所以事情就很棘手
: 不過這個抗體是哪來的?
: 如果是買來的他的data sheet有說可以作IP嗎?
是的
抗體皆為commercial
data sheet 有IP
打錯 抱歉
: 有的話用他建議的濃度試試看
: 這樣還作不出來就可以把sales叫來抱怨了 XD
: (前提是!! 你要先排除操作上的問題)
: 然後對買來的抗體不要太有信心
: 我試過買三隻才成功的
: (所以我愛死RT了~~!)
呵呵 對呀 現在先改用RT測一下cDNA
而且抗體affinity真的是...看運氣...
: 真的作不出來請好心又利害的學長姐或同學幫你試試看吧
: 說不定真的是抗體的問題
我可能會跟advisor討論看看吧
謝謝大家
也祝熱心的大家實驗順利呀(∩_∩)
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.170.122.219
1F：推 sisyphus:WB是最低等級啊~他有說可以作IP嗎?買認nature form是要 07/27 21:38
2F：→ sisyphus:整自己嗎 ? 你的antibody越寫我越看不懂了@"@ 07/27 21:38
※ 編輯: bider 來自: 118.170.122.219 (07/27 22:00)
3F：→ bider:修好嚕 nature form是因為之前就有了 所以就拿來用@@ 07/27 22:01
4F：推 blence:越改越糟,antigen是goat,用anti-mouse的1抗要認啥？ 07/27 22:17
※ 編輯: bider 來自: 118.170.122.219 (07/27 22:32)
5F：→ bider:表達能力不好 抱歉= =" 07/27 22:33