作者bider (买沉木)
看板Biotech
标题Re: [求救]IP抓不到target protien
时间Sun Jul 27 21:24:32 2008
※ 引述《sisyphus (变形虫)》之铭言：
: ※ 引述《bider (买沉木)》之铭言：
: : 小弟这几天做IP
: : 用monoclonal anti-mouse的1抗
: : polyclonal anti-goat的2抗
: : 结果western出来结果很多杂band
: : 想请问有没有前辈有类似经验的可以解决@@
: : 按理来说
: : 不同的Fc应该不会有问题才对
: : 是因为polyclonal造成的吗?
: 今天考完试刚好有时间来研究一下
: 首先你的antigen是mouse protein
: 1st ab 是goat anti mouse
: 2nd ab 是XX anti goat 这样吗?
应该这样说
antigen用的 target protien Ab
他的2抗是 anti-mouse
W是用 rabbit anti-goat的2抗
是为了怕认到IP Ab 的heavy chain light chain才用不同2抗
: 根据我遥远的记忆(不好意思我好久没作了@"@)
: 通常都会写抗体的的物种(吧?)
是的
但是由哪一种动物所做成的抗体应该没有什麽差别吧@@
不是很懂^^
: 这样可以很清楚的表达每个蛋白质的来源
: 这是不相干的事情
: 只是好奇一下
: IP或者其他免疫学方法会出问题通常都是一抗
: 因为二抗很容易就可以买到各式各样很棒的抗体
: 然後就如同有人推文说的
: 一抗用polyclonal比较容易成功一点
但是
我们家的monoclonal是认nature form
所以事情就很棘手
: 不过这个抗体是哪来的?
: 如果是买来的他的data sheet有说可以作IP吗?
是的
抗体皆为commercial
data sheet 有IP
打错 抱歉
: 有的话用他建议的浓度试试看
: 这样还作不出来就可以把sales叫来抱怨了 XD
: (前提是!! 你要先排除操作上的问题)
: 然後对买来的抗体不要太有信心
: 我试过买三只才成功的
: (所以我爱死RT了~~!)
呵呵 对呀 现在先改用RT测一下cDNA
而且抗体affinity真的是...看运气...
: 真的作不出来请好心又利害的学长姐或同学帮你试试看吧
: 说不定真的是抗体的问题
我可能会跟advisor讨论看看吧
谢谢大家
也祝热心的大家实验顺利呀(∩_∩)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.170.122.219
1F：推 sisyphus:WB是最低等级啊~他有说可以作IP吗?买认nature form是要 07/27 21:38
2F：→ sisyphus:整自己吗 ? 你的antibody越写我越看不懂了@"@ 07/27 21:38
※ 编辑: bider 来自: 118.170.122.219 (07/27 22:00)
3F：→ bider:修好噜 nature form是因为之前就有了 所以就拿来用@@ 07/27 22:01
4F：推 blence:越改越糟,antigen是goat,用anti-mouse的1抗要认啥？ 07/27 22:17
※ 编辑: bider 来自: 118.170.122.219 (07/27 22:32)
5F：→ bider:表达能力不好 抱歉= =" 07/27 22:33