作者howaboutme (霧煞風)
看板Biotech
標題[求救] 關於shRNA的藥品污染問題
時間Fri Jul 25 22:24:38 2008
如題
我們實驗室裡剛進了一個新的藥品
RNAi
可是卻在配藥過程污染了T^T
所以現在實驗室內選擇用
把含shRNA序列的plasmid 送到E.coli中去複製
再去把我們要的序列切下放到可表現GFP的質體中
最後轉到cell內,看螢光
就可以看到transfection的效率啦^^
可是,當我們決定完補救方案時
卻發現了含shRNA序列的plasmid有些大問題在
就是
1.plasmid上只有2個常用RE site,可是有一個RE site上的一個密碼子被mutate掉了
2.該shRNAi序列的位子做成了loop的形狀
現在發現了這些問題
讓我們覺得要進行補救方案好像滿困難的
有沒有板上的大大可以提供些意見的呢
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.105.39.173
※ 編輯: howaboutme 來自: 59.105.39.173 (07/25 22:34)
※ 編輯: howaboutme 來自: 59.105.39.173 (07/25 22:35)
1F：推 hek:shRNA通常都只有幾十個nt大小, 如果你一定要用那個RE site 07/26 12:42
2F：→ hek:建議直接order primer 把錯誤的site改回來 再clone到plasmid上 07/26 12:43
3F：推 liner76:loop的形狀不會造成polymerase從template上掉下來? 07/27 13:45
4F：→ liner76:額外的發問...懇請解答 07/27 13:45
5F：推 hek:我的意思是重新order含shRNA的oligo再clone一次,不是重新PCR 07/27 15:58