作者howaboutme (雾煞风)
看板Biotech
标题[求救] 关於shRNA的药品污染问题
时间Fri Jul 25 22:24:38 2008
如题
我们实验室里刚进了一个新的药品
RNAi
可是却在配药过程污染了T^T
所以现在实验室内选择用
把含shRNA序列的plasmid 送到E.coli中去复制
再去把我们要的序列切下放到可表现GFP的质体中
最後转到cell内,看萤光
就可以看到transfection的效率啦^^
可是,当我们决定完补救方案时
却发现了含shRNA序列的plasmid有些大问题在
就是
1.plasmid上只有2个常用RE site,可是有一个RE site上的一个密码子被mutate掉了
2.该shRNAi序列的位子做成了loop的形状
现在发现了这些问题
让我们觉得要进行补救方案好像满困难的
有没有板上的大大可以提供些意见的呢
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◆ From: 59.105.39.173
※ 编辑: howaboutme 来自: 59.105.39.173 (07/25 22:34)
※ 编辑: howaboutme 来自: 59.105.39.173 (07/25 22:35)
1F：推 hek:shRNA通常都只有几十个nt大小, 如果你一定要用那个RE site 07/26 12:42
2F：→ hek:建议直接order primer 把错误的site改回来 再clone到plasmid上 07/26 12:43
3F：推 liner76:loop的形状不会造成polymerase从template上掉下来? 07/27 13:45
4F：→ liner76:额外的发问...恳请解答 07/27 13:45
5F：推 hek:我的意思是重新order含shRNA的oligo再clone一次,不是重新PCR 07/27 15:58