作者BUSTARD (@@)
看板Biotech
標題[求救] 跑2D膠沒有點??
時間Thu Jul 17 20:12:58 2008
新手發問，請多多包涵^^"
最近實驗課要跑二維電泳
sample是綠竹筍
我們先將綠竹筍用果汁機打碎，然後有用acetone洗掉過多的鹽類(洗了五次左右)
並且有用ELISA reader定量，定出來的吸光值在0.2左右
因為老師教我們load 500ug 的 protein ， 所以代入標準曲線 換算出來我們
load了 74ul 的sample ，剩下的再用buffer補到200uL (因為我們跑的是11 cm strip)
然後加到holder中，再上礦物油，IEF的條件應該是都沒問題，因為別組的都OK
隔天再把strip放再鑄好的膠上跑，最後跑完並且染完色後，發現只有marker的band
蛋白質的部分都沒有band，怎麼想也想不出原因。
所以來這邊請教一下各位高手，到底是哪裡出問題了呢@@?
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 122.120.214.1
1F：推 TauriCrab:問助教不是更理想? 1D SAMPLE有進去 2D一定有點 07/17 21:38
2F：→ TauriCrab:不過我沒看過綠竹筍跑出來的狀況就是了 (遮) 07/17 21:39
3F：→ BUSTARD:恩謝謝囉!不過助教叫我們自己回去想 我也覺得是1D的問題 07/17 22:11
4F：→ BUSTARD:請問IEF還有甚麼要注意的嗎? 07/17 22:11
5F：推 vancent:請問你IEF的TOTAL VHR是多少? 07/17 22:50
6F：推 dankai:綠竹筍!! 吳老師~?? XDD 07/17 22:55
7F：→ dankai:建議可以先試試先跑SDS-PAGE 看是不是真的有蛋白質! 07/17 22:57
8F：→ BUSTARD:SDS page有蛋白質唷!! VHR我沒有記@@"不過是大家一起跑的 07/17 22:59
9F：→ BUSTARD:但是只有我們組的沒有band，很怪@@" 07/17 22:59
10F：推 dankai:你去看看VHR吧~~多注意看看電壓到底有沒有上去! 07/17 23:00
11F：→ dankai:還有strip放的時候是不是沒把空氣擠開~~ 07/17 23:01
12F：推 sisyphus:綠竹筍耶~~~好妙~~ 07/18 09:15
13F：→ sisyphus:你們有跑金針菇嗎 07/18 09:15
14F：推 bonbonyaho:金針菇也是真的有人在作... 07/25 17:01