作者BUSTARD (@@)
看板Biotech
标题[求救] 跑2D胶没有点??
时间Thu Jul 17 20:12:58 2008
新手发问，请多多包涵^^"
最近实验课要跑二维电泳
sample是绿竹笋
我们先将绿竹笋用果汁机打碎，然後有用acetone洗掉过多的盐类(洗了五次左右)
并且有用ELISA reader定量，定出来的吸光值在0.2左右
因为老师教我们load 500ug 的 protein ， 所以代入标准曲线 换算出来我们
load了 74ul 的sample ，剩下的再用buffer补到200uL (因为我们跑的是11 cm strip)
然後加到holder中，再上矿物油，IEF的条件应该是都没问题，因为别组的都OK
隔天再把strip放再铸好的胶上跑，最後跑完并且染完色後，发现只有marker的band
蛋白质的部分都没有band，怎麽想也想不出原因。
所以来这边请教一下各位高手，到底是哪里出问题了呢@@?
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.120.214.1
1F：推 TauriCrab:问助教不是更理想? 1D SAMPLE有进去 2D一定有点 07/17 21:38
2F：→ TauriCrab:不过我没看过绿竹笋跑出来的状况就是了 (遮) 07/17 21:39
3F：→ BUSTARD:恩谢谢罗!不过助教叫我们自己回去想 我也觉得是1D的问题 07/17 22:11
4F：→ BUSTARD:请问IEF还有甚麽要注意的吗? 07/17 22:11
5F：推 vancent:请问你IEF的TOTAL VHR是多少? 07/17 22:50
6F：推 dankai:绿竹笋!! 吴老师~?? XDD 07/17 22:55
7F：→ dankai:建议可以先试试先跑SDS-PAGE 看是不是真的有蛋白质! 07/17 22:57
8F：→ BUSTARD:SDS page有蛋白质唷!! VHR我没有记@@"不过是大家一起跑的 07/17 22:59
9F：→ BUSTARD:但是只有我们组的没有band，很怪@@" 07/17 22:59
10F：推 dankai:你去看看VHR吧~~多注意看看电压到底有没有上去! 07/17 23:00
11F：→ dankai:还有strip放的时候是不是没把空气挤开~~ 07/17 23:01
12F：推 sisyphus:绿竹笋耶~~~好妙~~ 07/18 09:15
13F：→ sisyphus:你们有跑金针菇吗 07/18 09:15
14F：推 bonbonyaho:金针菇也是真的有人在作... 07/25 17:01