※ 引述《DarkBANG (波希米亞狂想曲)》之銘言： : ※ 引述《linwei (我會好好加油^^)》之銘言： : : 請問 : : 這樣我可以解釋為 細胞都已經壞死 : : 因此annexin V 無法染上嗎？ : 不行...necrosis的細胞爆掉膜也是會外翻的 : 所以necrosis也會是Annexin V+ : 從圖來看我會建議你gate的範圍往左邊一些 : 或是先去gate FSC和SSC的去除左下那群再畫 : (個人認為...FLOW的gate範圍是一門藝術....XD) 同時畫gate也是很黑暗的自由心證 科科 只能說要憑著良心做 : : 但是我又有查一些paper : : 他們是利用Annexin V 與 PI 雙染的方式 : : 有染上annexin V 與 PI 的表示為壞死的細胞 : : 這樣表示說壞死的細胞annexin V 還是可以染阿?! : 最好先了解一下Annexin V和PI的染色原理 : 然後想一下apoptosis和necrosis如何區分 : 這樣你就會知道為什麼你的解釋是行不通的 這是幾個月前有人present看不懂 所以打成word解釋 至於要如何調gate ...這種東西很難紙上說明= =a 要鞭可以鞭大力點= =a ─────────────────────────────────────── 隨便Google到的圖 http://bioop.com/upimg/allimg/20061019/1055340.jpg 利用Annexin V and PI stain偵測apoptosis 原理: 1.細胞初期apoptosis時 細胞膜中的PS(phosphatidyserine)會由細胞膜內側外翻至細胞\ 膜外側 2.Annexin V蛋白對PS具有高度親合性 利用以上兩點在annexin V上面接上螢光物質 就可以偵測細胞是否有spoptosis現象 圖表解說 Y軸 染PI │ │ │ │ │ │ ＋│ │ ├───┼───── │ │ －│ │ │ │ └───┴─────X軸 染Annexin V － ＋ 把PI跟Annexin V一起染 -(Negative)區域代表沒有螢光訊號 也就是沒有PI或者annexin V附著 +(positive)區域代表有螢光訊號 所以上面那張圖可以更詳細分為四個區域 左下: PI跟Annexin V皆沒有訊號 通常這代表正常細胞 因為細胞膜沒有破裂PI無法進入染細胞核 PS也沒有外翻 所以annexinV也無法附著 也就沒有訊號 右下: PI沒有訊號 但Annexin V有訊號 這區代表開始apoptosis的細胞 因為才剛開始 細胞膜還沒完全破裂 所以PI進不去 但PS已外翻到細胞外膜 所以會有Annexin V訊號 右上: PI跟Annexin V都有訊號 這區代表apoptosis末期的細胞 因為到了apoptosis末期 細胞膜破裂 PI可以進入染細胞核 同時PS也外翻到細胞膜外 左上: PI有訊號 annexin V沒有訊號 通常這區為necrosis (這是通常的說法 也有可能是雜訊) 因為細胞急速被破壞來不及或無法啟動apoptosis機制 細胞膜會被破壞(外力或者化學物質) PI可以偵測到 但PS一樣還留在膜內 所以annexin V無法偵測到 -- EVA-RETAKE══════════╬SPHRYU ASUKA LANGLEY ◣ thePainter Wenn "Liebe" heißt,dieses Versprechen bis zum Tode ▎◥ ◥ ◣ nicht zu brechen...dann verspreche ich: ◣ ▍ ▁▃▄▅▄▃◥ dich immer zu lieben,und keinen Mann außer dir, ◥◥ ▌ ▇▌ ◥▆▅◢◥ solange ich lebe.Alles an mir...von Kopf bis Fuß, ◥▋ ▋"▅ ▁ sogar jedes Haar auf meinem Kopf gehört dir. ◥ ‵▆▆▇ --

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