※ 引述《DarkBANG (波希米亚狂想曲)》之铭言： : ※ 引述《linwei (我会好好加油^^)》之铭言： : : 请问 : : 这样我可以解释为 细胞都已经坏死 : : 因此annexin V 无法染上吗？ : 不行...necrosis的细胞爆掉膜也是会外翻的 : 所以necrosis也会是Annexin V+ : 从图来看我会建议你gate的范围往左边一些 : 或是先去gate FSC和SSC的去除左下那群再画 : (个人认为...FLOW的gate范围是一门艺术....XD) 同时画gate也是很黑暗的自由心证 科科 只能说要凭着良心做 : : 但是我又有查一些paper : : 他们是利用Annexin V 与 PI 双染的方式 : : 有染上annexin V 与 PI 的表示为坏死的细胞 : : 这样表示说坏死的细胞annexin V 还是可以染阿?! : 最好先了解一下Annexin V和PI的染色原理 : 然後想一下apoptosis和necrosis如何区分 : 这样你就会知道为什麽你的解释是行不通的 这是几个月前有人present看不懂 所以打成word解释 至於要如何调gate ...这种东西很难纸上说明= =a 要鞭可以鞭大力点= =a ─────────────────────────────────────── 随便Google到的图 http://bioop.com/upimg/allimg/20061019/1055340.jpg 利用Annexin V and PI stain侦测apoptosis 原理: 1.细胞初期apoptosis时 细胞膜中的PS(phosphatidyserine)会由细胞膜内侧外翻至细胞\ 膜外侧 2.Annexin V蛋白对PS具有高度亲合性 利用以上两点在annexin V上面接上萤光物质 就可以侦测细胞是否有spoptosis现象 图表解说 Y轴 染PI │ │ │ │ │ │ ＋│ │ ├───┼───── │ │ －│ │ │ │ └───┴─────X轴 染Annexin V － ＋ 把PI跟Annexin V一起染 -(Negative)区域代表没有萤光讯号 也就是没有PI或者annexin V附着 +(positive)区域代表有萤光讯号 所以上面那张图可以更详细分为四个区域 左下: PI跟Annexin V皆没有讯号 通常这代表正常细胞 因为细胞膜没有破裂PI无法进入染细胞核 PS也没有外翻 所以annexinV也无法附着 也就没有讯号 右下: PI没有讯号 但Annexin V有讯号 这区代表开始apoptosis的细胞 因为才刚开始 细胞膜还没完全破裂 所以PI进不去 但PS已外翻到细胞外膜 所以会有Annexin V讯号 右上: PI跟Annexin V都有讯号 这区代表apoptosis末期的细胞 因为到了apoptosis末期 细胞膜破裂 PI可以进入染细胞核 同时PS也外翻到细胞膜外 左上: PI有讯号 annexin V没有讯号 通常这区为necrosis (这是通常的说法 也有可能是杂讯) 因为细胞急速被破坏来不及或无法启动apoptosis机制 细胞膜会被破坏(外力或者化学物质) PI可以侦测到 但PS一样还留在膜内 所以annexin V无法侦测到 -- EVA-RETAKE══════════╬SPHRYU ASUKA LANGLEY ◣ thePainter Wenn "Liebe" heißt,dieses Versprechen bis zum Tode ▎◥ ◥ ◣ nicht zu brechen...dann verspreche ich: ◣ ▍ ▁▃▄▅▄▃◥ dich immer zu lieben,und keinen Mann außer dir, ◥◥ ▌ ▇▌ ◥▆▅◢◥ solange ich lebe.Alles an mir...von Kopf bis Fuß, ◥▋ ▋"▅ ▁ sogar jedes Haar auf meinem Kopf gehört dir. ◥ ‵▆▆▇ --

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