作者TONY1 ( )
看板Biotech
標題[求救] 抽RNA使用DNase
時間Wed Jul 16 14:45:01 2008
再抽RNA上面,原本學長都是使用Qiagen這套KIT
但我在使用後發現,這套KIT蠻好上手但其作DNase處理是在filter上
所以還是有些DNA殘留,但最大問題還是抽出來的total RNA量不夠多
所以有算用Trizol來做,我現在實驗主要是做RACE,找出cDNA全長
我想請問的是,一般大家再抽RNA會在特別用DNase處理,然後要如何除去
第二就是一般在做RACE時使用的total RNA會做DNase的處理嗎?
感謝大家的幫忙^^
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◆ From: 140.137.132.169
1F：推 sGoat:沒用過,但是我不是用kit做的... 07/16 15:07
2F：推 MrCAKE:DNase處理應該算是必要的步驟 07/16 15:28
3F：推 sGoat:基本上步驟越簡潔的方法加的必要性越高 07/16 15:40
4F：→ sGoat:用kit抽一定會比你用傳統mannual的方式還要雜,而且kit通常量 07/16 15:42
5F：→ sGoat:不大,要取多量RNA建議用傳統方式抽... 07/16 15:43
6F：→ sGoat:當然你也可以一次做很多管再混在一起,比較貴而已... 07/16 15:45
7F：→ TONY1:應該也要DNase處理,但用Trizol,還需要另外買什麼來去除 07/16 16:11
8F：推 sGoat:沒了吧,DNase已經是最廉價的方法了... 07/16 16:24
9F：→ sGoat:如果還是怕的話用mRNA column純化完再做RACE最乾淨 07/16 16:25
10F：→ sGoat:但是我覺得沒有那種必要性,一般total RNA就做的出來了 07/16 16:26
11F：推 ookubo:一般作RACE的RNA要求完整性，處裡時間越短，降解的越少， 07/16 17:03
12F：→ ookubo:這樣去做RT cDNA比較完整..5'比較不會接不上adaptor 07/16 17:04
13F：→ TONY1:非常感謝大家的回答^^收穫很多 07/16 18:13
14F：推 sGoat:除非你mRNA很長,不然1~2K的長度在保存良好的狀態下降解率低 07/17 10:29