作者TONY1 ( )
看板Biotech
标题[求救] 抽RNA使用DNase
时间Wed Jul 16 14:45:01 2008
再抽RNA上面,原本学长都是使用Qiagen这套KIT
但我在使用後发现,这套KIT蛮好上手但其作DNase处理是在filter上
所以还是有些DNA残留,但最大问题还是抽出来的total RNA量不够多
所以有算用Trizol来做,我现在实验主要是做RACE,找出cDNA全长
我想请问的是,一般大家再抽RNA会在特别用DNase处理,然後要如何除去
第二就是一般在做RACE时使用的total RNA会做DNase的处理吗?
感谢大家的帮忙^^
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◆ From: 140.137.132.169
1F：推 sGoat:没用过,但是我不是用kit做的... 07/16 15:07
2F：推 MrCAKE:DNase处理应该算是必要的步骤 07/16 15:28
3F：推 sGoat:基本上步骤越简洁的方法加的必要性越高 07/16 15:40
4F：→ sGoat:用kit抽一定会比你用传统mannual的方式还要杂,而且kit通常量 07/16 15:42
5F：→ sGoat:不大,要取多量RNA建议用传统方式抽... 07/16 15:43
6F：→ sGoat:当然你也可以一次做很多管再混在一起,比较贵而已... 07/16 15:45
7F：→ TONY1:应该也要DNase处理,但用Trizol,还需要另外买什麽来去除 07/16 16:11
8F：推 sGoat:没了吧,DNase已经是最廉价的方法了... 07/16 16:24
9F：→ sGoat:如果还是怕的话用mRNA column纯化完再做RACE最乾净 07/16 16:25
10F：→ sGoat:但是我觉得没有那种必要性,一般total RNA就做的出来了 07/16 16:26
11F：推 ookubo:一般作RACE的RNA要求完整性，处里时间越短，降解的越少， 07/16 17:03
12F：→ ookubo:这样去做RT cDNA比较完整..5'比较不会接不上adaptor 07/16 17:04
13F：→ TONY1:非常感谢大家的回答^^收获很多 07/16 18:13
14F：推 sGoat:除非你mRNA很长,不然1~2K的长度在保存良好的状态下降解率低 07/17 10:29