作者aDnEgVeIlL (觀察者)
看板Biotech
標題[求救] SDS-PAGE的LANE會膨脹，把marker擠扁
時間Tue Jul 15 00:07:23 2008
http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/gelgoofs/bizarre.html#3
有點像右邊那種，以marker來說，越下面就越瘦，簡直像被排擠一樣。
（不管放旁邊或中間都一樣）
當時老師檢查我的配方，說我sample buffer的TRIS太濃(1X大概250mM)，
如果已經製好sample的話，則考慮把marker和loading buffer混合看能不能好一點，
不過我那批sample很快就用完了，也不想冒險亂動marker，這次重配lysis和loading
兩種buffer，lysis只有10mM~30mM，3X loading buffer則是90mM和180mM。
我做排列組合去試，可是即使是最低的lysis(10mM)+3X loading(90mM)=36.6mM（1X）
sample lanes還是明顯膨脹，雖然marker(62.5mM)沒被擠那麼扁了，
還是沒法像一般常見的data一樣直，transfer後如果不染膜，也容易剪到別條lane。
既然marker的tris有62.5mM，為什麼還會被我的sample擠出去呢？
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太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，
這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。
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◆ From: 123.192.40.98
1F：推 liuse:你把marker補你的1X sample buffer到跟其他sample一樣體積 07/15 00:15
2F：→ liuse:情況會改善很多吧 07/15 00:15
3F：→ aDnEgVeIlL:請問marker和sample buffer混合不會有事嗎？ 07/15 00:22
4F：→ aDnEgVeIlL:譬如說band的位置改變之類的（by SDS or 2-ME） 07/15 00:23
5F：推 zoom8080:有的marker也是要加sample buffer去煮才能load... 07/15 00:34
7F：推 qqo8855436:他們家的maker超好用 3ul就可以看到了 不用煮 07/15 21:49
8F：→ qqo8855436:我覺得是你膠沒泡好耶?? 07/15 21:50
9F：→ qqo8855436:別人跑會這樣嗎?? 不然可能是電泳槽或電壓不穩?? 07/15 21:51