作者owl628 (owl628)
看板Biotech
標題[求救] pET-32a的問題
時間Sun Jul 13 19:42:32 2008
最近要把某段基因接到pET-32a中
利用Sal 1和Xho 1接進去
我們家習慣會把有切根沒切的vector去跑膠做個比較
雖然沒切是circular form,但還是可以跟有切的比較出差異
但是我最近從同一個來源的菌抽pET-32a
結果沒切的pattern會有兩種不同的結果
有時候是這種,有時候是另一種
想請問一下是因為circular form的關係嗎???
還是怎樣.....????
麻煩大家了,謝謝~
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◆ From: 140.128.139.218
1F：推 bublelan:SalI和XhoI會自己接起來(compatible cohesive end)所以如 07/13 21:43
2F：→ bublelan:果vector和insert都用這兩個酵素切的話,就會看到看到兩種 07/13 21:44
3F：→ bublelan:大小不同的plasmid了 07/13 21:45
4F：推 bublelan:分別為vector only及有接進去...不知道有沒有回答到^^" 07/13 21:48
5F：→ owl628:我說的是還沒有做ligation時,就只是把沒切的vector去跑膠, 07/13 21:57
6F：→ owl628:結果沒切的vector這次是這個pattern,下次可能是另一種,就是 07/13 21:59
7F：→ owl628:這兩種不同的pattern但明明是同一個來源,所以我不懂為什麼 07/13 21:59
8F：→ owl628:沒切的vector為何會出現兩種不同的pattern,謝謝~ 07/13 22:00
9F：推 turtle24:supercoil? 07/13 22:50
10F：推 MrCAKE:plasmid的form很多 沒切過的話可能每個batch抽的都不同 07/14 00:21
11F：→ MrCAKE:完全不需要理會這種問題 切完是對的大小就OK了 07/14 00:23
12F：→ owl628:因為我以前這樣做,其他的vector都只會有一種form出現,只有 07/14 08:28
13F：→ owl628:pET-32a會這樣,所以絕得很怪,所以說我不用在意這個現象嗎?? 07/14 08:29
14F：→ owl628:謝謝大家的回答^^ 07/14 08:29
15F：推 yaliu:有時候同一個sample 用不同批做的gel跑，長相也會不一樣 07/15 00:31
16F：→ yaliu:基本上，沒切的plasmid 我只用來看看量或跟切過的plasmid 07/15 00:32
17F：→ yaliu:對照一下看有沒有切動而已... 07/15 00:32
18F：→ yaliu:它跑的位置在哪，基本上我都不在意XD 07/15 00:33