作者owl628 (owl628)
看板Biotech
标题[求救] pET-32a的问题
时间Sun Jul 13 19:42:32 2008
最近要把某段基因接到pET-32a中
利用Sal 1和Xho 1接进去
我们家习惯会把有切根没切的vector去跑胶做个比较
虽然没切是circular form,但还是可以跟有切的比较出差异
但是我最近从同一个来源的菌抽pET-32a
结果没切的pattern会有两种不同的结果
有时候是这种,有时候是另一种
想请问一下是因为circular form的关系吗???
还是怎样.....????
麻烦大家了,谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.139.218
1F：推 bublelan:SalI和XhoI会自己接起来(compatible cohesive end)所以如 07/13 21:43
2F：→ bublelan:果vector和insert都用这两个酵素切的话,就会看到看到两种 07/13 21:44
3F：→ bublelan:大小不同的plasmid了 07/13 21:45
4F：推 bublelan:分别为vector only及有接进去...不知道有没有回答到^^" 07/13 21:48
5F：→ owl628:我说的是还没有做ligation时,就只是把没切的vector去跑胶, 07/13 21:57
6F：→ owl628:结果没切的vector这次是这个pattern,下次可能是另一种,就是 07/13 21:59
7F：→ owl628:这两种不同的pattern但明明是同一个来源,所以我不懂为什麽 07/13 21:59
8F：→ owl628:没切的vector为何会出现两种不同的pattern,谢谢~ 07/13 22:00
9F：推 turtle24:supercoil? 07/13 22:50
10F：推 MrCAKE:plasmid的form很多 没切过的话可能每个batch抽的都不同 07/14 00:21
11F：→ MrCAKE:完全不需要理会这种问题 切完是对的大小就OK了 07/14 00:23
12F：→ owl628:因为我以前这样做,其他的vector都只会有一种form出现,只有 07/14 08:28
13F：→ owl628:pET-32a会这样,所以绝得很怪,所以说我不用在意这个现象吗?? 07/14 08:29
14F：→ owl628:谢谢大家的回答^^ 07/14 08:29
15F：推 yaliu:有时候同一个sample 用不同批做的gel跑，长相也会不一样 07/15 00:31
16F：→ yaliu:基本上，没切的plasmid 我只用来看看量或跟切过的plasmid 07/15 00:32
17F：→ yaliu:对照一下看有没有切动而已... 07/15 00:32
18F：→ yaliu:它跑的位置在哪，基本上我都不在意XD 07/15 00:33