作者sunspot438 (土地公爺爺~拜託你了!!)
看板Biotech
標題[求救] Western一直出現海苔!!
時間Wed Jul 2 21:26:31 2008
想請教各位先進~
我目前手上有2株cell line
HELA , C33A 都是子宮頸癌細胞
想看的protein : Rb , p53 等致癌基因
control用b-actin (Biovision Monoconal mouse)
問題來了~
b-actin 再3T3很明顯 , 但是在HELA或C33A卻看不太到??
不知出了什麼問題 , 抗體的species reactivity都包含 Hu
還請各位前輩指教可能哪裡出了問題
另外就是Rb , datasheet裡面建議用BSA blocking 結果: 海苔
改以安佳 結果: 海苔
（一二抗皆以blocking solution稀釋）
抗體濃度也由高到低試了很多次~ 結果: 海苔
惠不會是抗體壞了 (聖誕牌....哀)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.21.137
1F：推 t123401221:海苔??是啥..... 07/02 22:15
2F：推 pent:是說整個well都黑黑的一陀嗎? 07/02 22:41
3F：推 greenmoon00:是整片黑的叫海苔~~ 07/02 22:42
4F：推 qqo8855436:你1 and 2 抗濃度可以說一下嗎??? 07/02 22:55
5F：→ sunspot438:一抗1/200 1/500 1/1000都試過~ 二抗1/10000 07/03 11:43
6F：→ nixo:一抗再稀釋看看，安佳濃度加高些。 07/03 17:54
7F：推 qqo8855436:1抗 1:2000 試試 安佳以前我是用5%的 不知到您是?? 07/03 20:09
8F：推 sweetE:wash不夠 也有可能出現很髒的background 07/03 21:27
9F：→ sweetE:可以試試每10min換一次TBST 總共操作三次或四次 次數可調整 07/03 21:28
10F：推 sktzy:提高tween 20和TBS的濃度也可以試試 07/04 01:22