作者sunspot438 (土地公爷爷~拜托你了!!)
看板Biotech
标题[求救] Western一直出现海苔!!
时间Wed Jul 2 21:26:31 2008
想请教各位先进~
我目前手上有2株cell line
HELA , C33A 都是子宫颈癌细胞
想看的protein : Rb , p53 等致癌基因
control用b-actin (Biovision Monoconal mouse)
问题来了~
b-actin 再3T3很明显 , 但是在HELA或C33A却看不太到??
不知出了什麽问题 , 抗体的species reactivity都包含 Hu
还请各位前辈指教可能哪里出了问题
另外就是Rb , datasheet里面建议用BSA blocking 结果: 海苔
改以安佳 结果: 海苔
（一二抗皆以blocking solution稀释）
抗体浓度也由高到低试了很多次~ 结果: 海苔
惠不会是抗体坏了 (圣诞牌....哀)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.21.137
1F：推 t123401221:海苔??是啥..... 07/02 22:15
2F：推 pent:是说整个well都黑黑的一陀吗? 07/02 22:41
3F：推 greenmoon00:是整片黑的叫海苔~~ 07/02 22:42
4F：推 qqo8855436:你1 and 2 抗浓度可以说一下吗??? 07/02 22:55
5F：→ sunspot438:一抗1/200 1/500 1/1000都试过~ 二抗1/10000 07/03 11:43
6F：→ nixo:一抗再稀释看看，安佳浓度加高些。 07/03 17:54
7F：推 qqo8855436:1抗 1:2000 试试 安佳以前我是用5%的 不知到您是?? 07/03 20:09
8F：推 sweetE:wash不够 也有可能出现很脏的background 07/03 21:27
9F：→ sweetE:可以试试每10min换一次TBST 总共操作三次或四次 次数可调整 07/03 21:28
10F：推 sktzy:提高tween 20和TBS的浓度也可以试试 07/04 01:22