作者doskoi (doskoi)
看板Biotech
標題[求救]cloning的sequence出錯了
時間Sun Jun 29 02:37:23 2008
最近在做cloning
有在primer上加上restriction site
做完pcr後把product插入vector
送入E.coli後抽plasmid去做定序
晴天霹靂阿~~~
sequence的正確率居然只有9x%
我是用taq去做PCR的
本來想說換成Pfu正確率應該會高一點
但又怕pfu的proofresding功能把一開始沒配對的restriction site sequence給修掉
請問一下這種情形有什麼比較好的解決方法嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.89.188
1F：推 cryosakura:用Pfu不會發生你擔心的問題,因為你的primer長,修不到 06/29 09:53
2F：推 yaliu:可以看看定序完的訊號是否可信.... 06/29 12:22
3F：→ doskoi:你的意思是定序不一定正確嗎? 要怎麼看阿? 06/29 16:56
4F：推 liuse:應該可以要一張訂序的intensity 就訂出鹼基的強度 06/29 19:37
5F：→ liuse:越後面會越來越亂 06/29 19:37
6F：推 tsubasawolfy:看長度吧ˊˇˋ 每家公司不同 EX:明X 老闆只看800前 06/29 19:41
7F：推 yaliu:liuse大講的沒錯，看定序的訊號圖 06/29 22:52