作者doskoi (doskoi)
看板Biotech
标题[求救]cloning的sequence出错了
时间Sun Jun 29 02:37:23 2008
最近在做cloning
有在primer上加上restriction site
做完pcr後把product插入vector
送入E.coli後抽plasmid去做定序
晴天霹雳阿~~~
sequence的正确率居然只有9x%
我是用taq去做PCR的
本来想说换成Pfu正确率应该会高一点
但又怕pfu的proofresding功能把一开始没配对的restriction site sequence给修掉
请问一下这种情形有什麽比较好的解决方法吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.89.188
1F：推 cryosakura:用Pfu不会发生你担心的问题,因为你的primer长,修不到 06/29 09:53
2F：推 yaliu:可以看看定序完的讯号是否可信.... 06/29 12:22
3F：→ doskoi:你的意思是定序不一定正确吗? 要怎麽看阿? 06/29 16:56
4F：推 liuse:应该可以要一张订序的intensity 就订出硷基的强度 06/29 19:37
5F：→ liuse:越後面会越来越乱 06/29 19:37
6F：推 tsubasawolfy:看长度吧ˊˇˋ 每家公司不同 EX:明X 老板只看800前 06/29 19:41
7F：推 yaliu:liuse大讲的没错，看定序的讯号图 06/29 22:52