作者yabia1357 (yabia)
看板Biotech
標題[求救] 我的PCR跑不出東西~ 救命阿~~
時間Fri Jun 27 13:23:40 2008
我的問題和裡面的一樣,但是中的文章沒有確切的解答出來...
所以只好跳出來向大家求救同樣問題...
是這樣的....
我在三個星期前,跑了一批PCR兩次,都有我要的結果出來.
上星期,因為實驗需要,我又再跑:同樣sample,同樣藥劑,同樣黏合溫度,同
樣primer....等,完全一樣的條件,卻跑出空空如也的照膠照片<=除了Marker
跑得真漂亮.... Q.Q
well,我以為我不小心手殘,隔天比較小心地重做一次,同樣空.
我開始檢討是不是因為primer或是sample壞掉,我有拿去做電泳看膠片,是OK的.
我也有考慮過的,啥ddH2O或是黏合時間的問題...這星期都把時間花在測
這個,不過都沒跑出任何東西,只有Marker跑的很漂亮.... Q.Q
我開始在考慮是不是我的藥劑的問題?? <=雖然我不覺得經過兩個星期後就壞光
光了.(冰在-20度冰箱中都沒碰)打算明天測試看看.
請問大家有沒有啥意見可以幫忙給我參考一下?? 感激不盡!! 如果我測試成功,
答對的人我請吃飯!! Q.Q <=光弄個PCR都弄不出來,真的超丟臉的... >_<~
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◆ From: 140.122.152.241
1F：推 nixo:有換機器跑過嗎？ 06/27 13:53
2F：推 sGoat:Taq是同一批嗎?這些藥劑只有你在使用嗎?問一下吧... 06/27 15:55
3F：→ sGoat:實驗室常發生的問題是別人的保存習慣不好,問一下吧... 06/27 15:56
4F：推 sGoat:真的要找的話,做個control吧,別忘了正統PCR是要做control的. 06/27 16:28
5F：→ yabia1357:有換機器,藥劑除Taq,DMSO,其他都只我一個人在用. 06/27 17:56
6F：→ yabia1357:完全沒做control,請問要拿啥來做control呢?有商品? @_@y 06/27 17:57
7F：推 seal0413:可能是taq enzyme...建議應該是要你做positive control 06/27 18:20
8F：推 davideason:實驗室學弟妹超常問的問題:學長學長,怎麼沒有band?? 06/27 18:52
9F：→ davideason:通常我都建議,就是在簡單的實驗也必須+control 06/27 18:54
10F：→ davideason:重點是,若干時間之後,原班人馬又一定會問,學長學長 06/27 18:55
11F：→ davideason:怎麼沒...話還沒說完,我已經翻桌了 06/27 18:56
12F：推 jademan:下次記得拿到試劑就先分裝,遇到沒出來,舊的就全丟了.換新 06/27 19:34
13F：→ pupuwu:機器也換啦?同樣 一台的再現性呢? 06/27 19:47
14F：推 YT:dNTP壞掉? dNTP也不能離冰太久~我這聽說前輩有人dNTP壞掉所以P 06/28 16:08
15F：→ YT:不出來..加完後也最好先放冰上~當然primer也一樣... 06/28 16:09
16F：推 qqo8855436:你的primer是哪一家的?? 之前有人跑出來過嗎?? 06/28 17:24