作者jsi (jsi)
看板Biotech
標題[討論] 請問冷凍切片固定
時間Fri Jun 27 00:02:29 2008
目的:在冷凍切片做免疫組織染色
目前實驗需要在小鼠進行全身性灌流(perfusion)
原本使用PBS灌流 取下各種器官後浸泡在蔗糖溶液中脫水
接著冷凍包埋 切片 然後進行固定步驟(4%PFA 10min)
但發現 某些器官切片在顯微鏡底下可觀察到結構破損
推測是因為其組織較軟 在切片過程中受損
後來有人建議先用4%PFA進行灌流 先將器官固定 再進行脫水與包埋
但是 這樣固定時間太長 恐將影響之後抗體作用 (ab-ABC or DAB呈色法)
想請教 若改用methanol或acetone進行灌流並固定 是否適合?
是否會影響之後的包埋步驟?
參考abcam網頁:
Fixation and permeabilization for IHC and ICC
http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11462
此外還看到另一種方法 GMA embedding for immmunohistochemistry
http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11464
他 No crosslinking, no antigen retrieval 的特點 很適合我實驗需求
google發現好像會用於電顯組織 但不甚確定
請問這是普遍常用的方法嗎? 若要用於冷凍切片適合嗎?
因為第一次知道這個方法 :P 想要瞭解一下
謝謝大家!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.20.55
1F：推 iiidns:還是建議PBS後固定液灌流 組織會比較完整性... 06/29 21:53
2F：→ iiidns:目前 大部分抗體倒是沒有因為固定液的影響(在我做的實驗) 06/29 21:54
3F：→ iiidns:灌流後取下器官在放置於固定液O/N 之後再更換糖水(脫水) 06/29 21:56
4F：→ jsi:thanks!^^ 07/05 00:50