作者jsi (jsi)
看板Biotech
标题[讨论] 请问冷冻切片固定
时间Fri Jun 27 00:02:29 2008
目的:在冷冻切片做免疫组织染色
目前实验需要在小鼠进行全身性灌流(perfusion)
原本使用PBS灌流 取下各种器官後浸泡在蔗糖溶液中脱水
接着冷冻包埋 切片 然後进行固定步骤(4%PFA 10min)
但发现 某些器官切片在显微镜底下可观察到结构破损
推测是因为其组织较软 在切片过程中受损
後来有人建议先用4%PFA进行灌流 先将器官固定 再进行脱水与包埋
但是 这样固定时间太长 恐将影响之後抗体作用 (ab-ABC or DAB呈色法)
想请教 若改用methanol或acetone进行灌流并固定 是否适合?
是否会影响之後的包埋步骤?
参考abcam网页:
Fixation and permeabilization for IHC and ICC
http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11462
此外还看到另一种方法 GMA embedding for immmunohistochemistry
http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11464
他 No crosslinking, no antigen retrieval 的特点 很适合我实验需求
google发现好像会用於电显组织 但不甚确定
请问这是普遍常用的方法吗? 若要用於冷冻切片适合吗?
因为第一次知道这个方法 :P 想要了解一下
谢谢大家!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.20.55
1F：推 iiidns:还是建议PBS後固定液灌流 组织会比较完整性... 06/29 21:53
2F：→ iiidns:目前 大部分抗体倒是没有因为固定液的影响(在我做的实验) 06/29 21:54
3F：→ iiidns:灌流後取下器官在放置於固定液O/N 之後再更换糖水(脱水) 06/29 21:56
4F：→ jsi:thanks!^^ 07/05 00:50