作者ycmi (you can make it)
看板Biotech
標題Re: [求救] 想請問測posttranslational modificati …
時間Mon Jun 23 06:44:13 2008
※ 引述《puec2 (^^y)》之銘言：
: ※ 引述《ycmi (you can make it)》之銘言：
: : 想問欲利用wetern blot去測某protein的posttranslational modification，例：
: : phophorylation or acetylation...etc.時，在收lysate或處理sample時，不知有
: : 經驗的前輩們對於這個步驟是否該注意些什麼事情？例如，要避免什麼動作或應該
: : 做什麼動作or加什麼lysis buffer等，才可以容易看到modification？或是才不會破
: : 壞我想要看的現象？謝謝！ :)
: acetylation我不清楚，如果是要看phosphorylation，lysis buffer裡面要加
: protease inhibitor, phosphatase inhibitor 像是 sodium vanadate,
: PMSF, antipain.....等。當然準備的過程全程放冰上是需要的，不過煮完以後
: 就不要放冰上了，不然sds會沈澱。
那再請問各位大大...
若我已經用super lysis buffer了，是否還需再加inhibitor？
另外，若是stock在-20度C的話，會使phosphate掉嗎？@@ 還是什麼因素，為何要存於
-80度C呢？或者說，一定要存於-80度C嗎？
謝謝各位了 ~"~
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◆ From: 140.112.206.179
1F：推 blence:你寫super lysis buffer是沒什麼人看得懂得 06/23 07:52
2F：推 HIbaby:^^ 06/23 08:20
3F：推 tsubasawolfy:看他的datasheet上面有沒有寫加inhibitor 06/23 11:39
4F：→ tsubasawolfy:-20.-80保存期限的差別吧? 06/23 11:40
5F：→ ycmi:super lysis buffer是指最強的lysis buffer 據說是所有蛋白質 06/23 19:58
6F：→ ycmi:皆失活，所以，常常不外加inhibitor，我才會如此提問... 06/23 19:59
7F：→ ycmi:所以，使用inhibitor，主要是因為怕phosphotase or protease? 06/23 20:01