作者oddball (天涯宦遊人~)
看板Biotech
標題有關histone protein的蛋白質電泳
時間Sun Jun 22 10:57:15 2008
我抽取組蛋的的protocol是以下這個 (acid extraction)
http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/Histone%20extraction%20protocol.pdf
但是物種是阿拉伯芥(植物)
但最後去除上清液後是用8M urea回溶, 溶液會呈白色混濁狀
在跑SDS-PAGE後染Commassie blue 不會看到很多條的Protein band
只有一條很明顯的 大約55KD的band (loading protein:10ug )
以這樣的蛋泳模式接著進行western blot, 1抗是H2B (大小約17左右)
會壓到55KD的訊號 O_O 履試不爽
請問在我的做法中有什麼地方出錯 或少做, 導致這樣的結果嗎?
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.52.104
1F：推 blence:幾個問題,1去除上清液?加acid後離心的上清液? 2urea回溶該 06/22 14:14
2F：→ blence:沒有? 3western沒有17k的H2B? 06/22 14:17
3F：→ blence:如果把上清液去除,那8M urea是要回溶pellet? 06/22 14:19
4F：→ oddball:加acid後, 離心的上清液去除, pellet以8M urea回溶 06/22 14:19