作者ndmcgun (研ㄧ)
看板Biotech
標題[求救] caspase 3的Western blot
時間Sat Jun 21 19:01:38 2008
我們實驗室是做敗血症研究
有很多paper說敗血症晚期的時候體內會有大量廣泛的apoptosis 尤其在免疫細胞上
造成免疫力下降而被病原感染造成死亡
我現在使用一個藥物能抑制apoptosis 希望可以改善敗血症的存活
使用動物：大鼠
要看的tissue：肺、肝、脾＆腎
判斷apoptosis的程度：cleaved caspase 3
問題：Western blot壓出來band很清楚(Cell Signaling,一抗1:1000,二抗1:1500)
但是連sham組（假手術）都有，而且許多甚至比引發敗血症手術的組別還要濃
（這個抗體可以壓出兩個cleaved form：17 & 19 KDa，看產品protocol 17 KDa
比較specific for apoptosis）
廠商說可能是我製備sample的時候用sonification homogenize造成的，但每一組
都有homogenize啊
請問各位可能是什麼原因呢？
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◆ From: 192.192.90.35
1F：推 seal0413:之前已經有paper確定敗血症引發的apoptosis是因caspase3 06/27 11:24
2F：→ seal0413:嗎?何不先確定真的有apoptosis的現象差異再看caspase3 06/27 11:25
3F：推 seal0413:何不試試看其他的 ex:DNA fragmentation 06/27 11:29
4F：→ seal0413:要不做切片染annexin 也很 ok 06/27 11:31
5F：→ ndmcgun:apotosis 一定會經過caspase 3的活化，另外口試在即 06/27 19:03
6F：→ ndmcgun:也來不及做其他的了，不過還是謝謝您的回答！ 06/27 19:04
7F：推 seal0413:apoptosis有caspase dependent or independent 06/27 23:55
8F：→ seal0413:因為你是組織的wb 所以建議你可以放positive control 06/27 23:57
9F：→ seal0413:若真的是caspase3 或許是因為你組織蛋白太濃而有這樣的 06/27 23:59
10F：→ seal0413:結果~或許減少蛋白量就有差異了~祝你口試順利囉 06/28 00:00