作者ndmcgun (研ㄧ)
看板Biotech
标题[求救] caspase 3的Western blot
时间Sat Jun 21 19:01:38 2008
我们实验室是做败血症研究
有很多paper说败血症晚期的时候体内会有大量广泛的apoptosis 尤其在免疫细胞上
造成免疫力下降而被病原感染造成死亡
我现在使用一个药物能抑制apoptosis 希望可以改善败血症的存活
使用动物：大鼠
要看的tissue：肺、肝、脾＆肾
判断apoptosis的程度：cleaved caspase 3
问题：Western blot压出来band很清楚(Cell Signaling,一抗1:1000,二抗1:1500)
但是连sham组（假手术）都有，而且许多甚至比引发败血症手术的组别还要浓
（这个抗体可以压出两个cleaved form：17 & 19 KDa，看产品protocol 17 KDa
比较specific for apoptosis）
厂商说可能是我制备sample的时候用sonification homogenize造成的，但每一组
都有homogenize啊
请问各位可能是什麽原因呢？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.90.35
1F：推 seal0413:之前已经有paper确定败血症引发的apoptosis是因caspase3 06/27 11:24
2F：→ seal0413:吗?何不先确定真的有apoptosis的现象差异再看caspase3 06/27 11:25
3F：推 seal0413:何不试试看其他的 ex:DNA fragmentation 06/27 11:29
4F：→ seal0413:要不做切片染annexin 也很 ok 06/27 11:31
5F：→ ndmcgun:apotosis 一定会经过caspase 3的活化，另外口试在即 06/27 19:03
6F：→ ndmcgun:也来不及做其他的了，不过还是谢谢您的回答！ 06/27 19:04
7F：推 seal0413:apoptosis有caspase dependent or independent 06/27 23:55
8F：→ seal0413:因为你是组织的wb 所以建议你可以放positive control 06/27 23:57
9F：→ seal0413:若真的是caspase3 或许是因为你组织蛋白太浓而有这样的 06/27 23:59
10F：→ seal0413:结果~或许减少蛋白量就有差异了~祝你口试顺利罗 06/28 00:00