作者Gevalia (new life)
看板Biotech
標題[求救] 關於 Western blot
時間Fri Jun 20 13:41:12 2008
想請教一下大家
當在 1st Ab 非常弱的情況下做 western blot
每個 well 要 load 多少濃度的 protein 比較適當?
依照我們的 protocol 是 25 ug/well
可是上次完全沒有東西染出來
所以這次想用 100 ug/well or higher, 不知道可不可行
此外, 1st Ab 上次是用 1:1500 稀釋
這次想試 1:500 or 1:100, 想請問這樣可行嗎?
目前想到只有這兩種方法, 還有其他建議嗎?
感謝大家的回答
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 71.12.189.97
1F：推 lail:你說的方法都ok,不過建議一次改一種條件,以免之後不知道哪個 06/20 22:04
2F：→ lail:條件最重要,另外就是可以2抗在4度C作用over night,我有一些不 06/20 22:04
3F：→ lail:易偵測的的蛋白質用這種方法就可以偵測到了,祝好運^^ 06/20 22:05
4F：→ REIDO:請問通常block、1st、2nd，哪種4度C作用over night比較好？ 06/21 14:59
5F：→ blence:你綜覽各家廠商protocal看看,應該都以1st為o/n最佳選擇建議 06/21 18:31
6F：推 lail:我通常也都是1抗o/n,非不得已時才會1抗2抗都o/n 06/21 21:12
7F：推 oddball:還有wash的時候Tween 20的濃度可調低, 只是這樣也會比較髒 06/22 10:47
8F：推 tincta:1抗o/n效果較佳，也有oven37度1h（但就只能用一次，比較傷 06/23 02:52
9F：→ tincta:的方法，block n/o我覺得沒差，但是2抗個人以為不宜n/o， 06/23 02:53
10F：→ tincta:因為會使背景值過高，容易出現黑團，反而模糊band 06/23 02:53