作者Gevalia (new life)
看板Biotech
标题[求救] 关於 Western blot
时间Fri Jun 20 13:41:12 2008
想请教一下大家
当在 1st Ab 非常弱的情况下做 western blot
每个 well 要 load 多少浓度的 protein 比较适当?
依照我们的 protocol 是 25 ug/well
可是上次完全没有东西染出来
所以这次想用 100 ug/well or higher, 不知道可不可行
此外, 1st Ab 上次是用 1:1500 稀释
这次想试 1:500 or 1:100, 想请问这样可行吗?
目前想到只有这两种方法, 还有其他建议吗?
感谢大家的回答
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◆ From: 71.12.189.97
1F：推 lail:你说的方法都ok,不过建议一次改一种条件,以免之後不知道哪个 06/20 22:04
2F：→ lail:条件最重要,另外就是可以2抗在4度C作用over night,我有一些不 06/20 22:04
3F：→ lail:易侦测的的蛋白质用这种方法就可以侦测到了,祝好运^^ 06/20 22:05
4F：→ REIDO:请问通常block、1st、2nd，哪种4度C作用over night比较好？ 06/21 14:59
5F：→ blence:你综览各家厂商protocal看看,应该都以1st为o/n最佳选择建议 06/21 18:31
6F：推 lail:我通常也都是1抗o/n,非不得已时才会1抗2抗都o/n 06/21 21:12
7F：推 oddball:还有wash的时候Tween 20的浓度可调低, 只是这样也会比较脏 06/22 10:47
8F：推 tincta:1抗o/n效果较佳，也有oven37度1h（但就只能用一次，比较伤 06/23 02:52
9F：→ tincta:的方法，block n/o我觉得没差，但是2抗个人以为不宜n/o， 06/23 02:53
10F：→ tincta:因为会使背景值过高，容易出现黑团，反而模糊band 06/23 02:53