作者bbiioo (梅子)
看板Biotech
標題[求救] chromosome dna extration
時間Thu Jun 19 21:34:14 2008
最近要抽chromosome DNA作PCR
但是抽出來的DNA品質都不是很好 (跑gel會smear)
導致PCR也作不好
想請教各位高手
我的步驟哪裡需要改進的
以下是我的步驟：(我要抽真菌的)
1.取孢子用液態氮磨
2.粉末加入Buffer(含有tris、EDTA、SDS、2-ME)震盪混勻後在65度下作用
3.加phenol混勻
4.離心取上清液加phenol/chloroform 混勻
5.離心取上清液加isopropanol & NaOAc -20度下沉澱
6.沉澱物用乙醇wash
7.乾燥，加TE buffer
想問~~
在磨我的菌體時~是不是不能磨太碎??
是不是第3步驟就不能大力搖了??
還有 最後回溶時加TE會比加2次水 保存來的久嗎??
問題很多~~
感謝大家耐心的看!!!!!
麻煩大家幫我解答一下疑惑了!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.38.65
1F：推 Istyle:磨碎一點比較好 因第二步的bf就已經破菌 就不能劇烈震盪了 06/20 00:27
2F：→ bbiioo:不過~我有聽到一個說法 是 說如果磨太碎 06/22 23:14
3F：→ bbiioo:有可能讓 chromosome DNA斷掉...這有這種可能性嗎?? 06/22 23:15
4F：推 davideason:我沒有抽過孢子,但如果不是作southern,而只是要PCR 06/23 12:53
5F：→ davideason:隨便抽就可以 06/23 12:54
6F：→ davideason:另外,抽DNA時我不會用震盪法,只單純用手輕輕搖勻 06/23 12:56
7F：→ davideason:回溶只用水 06/23 12:56
8F：→ bbiioo:恩!!我只用手搖...不然..真的非常容易斷 06/23 13:49