作者bbiioo (梅子)
看板Biotech
标题[求救] chromosome dna extration
时间Thu Jun 19 21:34:14 2008
最近要抽chromosome DNA作PCR
但是抽出来的DNA品质都不是很好 (跑gel会smear)
导致PCR也作不好
想请教各位高手
我的步骤哪里需要改进的
以下是我的步骤：(我要抽真菌的)
1.取孢子用液态氮磨
2.粉末加入Buffer(含有tris、EDTA、SDS、2-ME)震荡混匀後在65度下作用
3.加phenol混匀
4.离心取上清液加phenol/chloroform 混匀
5.离心取上清液加isopropanol & NaOAc -20度下沉淀
6.沉淀物用乙醇wash
7.乾燥，加TE buffer
想问~~
在磨我的菌体时~是不是不能磨太碎??
是不是第3步骤就不能大力摇了??
还有 最後回溶时加TE会比加2次水 保存来的久吗??
问题很多~~
感谢大家耐心的看!!!!!
麻烦大家帮我解答一下疑惑了!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.38.65
1F：推 Istyle:磨碎一点比较好 因第二步的bf就已经破菌 就不能剧烈震荡了 06/20 00:27
2F：→ bbiioo:不过~我有听到一个说法 是 说如果磨太碎 06/22 23:14
3F：→ bbiioo:有可能让 chromosome DNA断掉...这有这种可能性吗?? 06/22 23:15
4F：推 davideason:我没有抽过孢子,但如果不是作southern,而只是要PCR 06/23 12:53
5F：→ davideason:随便抽就可以 06/23 12:54
6F：→ davideason:另外,抽DNA时我不会用震荡法,只单纯用手轻轻摇匀 06/23 12:56
7F：→ davideason:回溶只用水 06/23 12:56
8F：→ bbiioo:恩!!我只用手摇...不然..真的非常容易断 06/23 13:49