作者threestars (等待)
看板Biotech
標題Re: [求救] touchdown pcr
時間Mon Jun 16 14:53:48 2008
※ 引述《bbiioo (梅子)》之銘言：
: 想請問這個pcr
: 是什麼情況下可以使用
: 是 想要增加產物產量嗎?
: 因為現在在進行的pcr
: 還在試他的最佳的Tm
: 老師是建議跑gradient
: 我是想說利用這個方法找
: 不知道可不可以
: 我是要從chromosome DNA 找出目標基因來
: 如果說用TOUCHDOWN這個方法
: 是每一個cycle降0.5度吧?
: 那範圍怎麼設呢??
primer 黏合溫度一開始比Tm值 高15~18度 每cycle降1度
直到溫度到比Tm值低五到六度
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如果活在世上只是扮演著大家所期望的自己
那扮演好了又怎樣
不如靜靜的讓自己消失吧
總是多餘的存在只是種荒謬的錯誤
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.223.228.164
1F：推 bbiioo:恩~我會試試的~~謝謝囉 06/16 20:32
2F：推 sGoat:這是gradient吧?touchdown是要減少非專一性結合,2個溫差即可 06/20 17:27
3F：→ threestars:不對吧! touchdown是省找尋黏合溫度的時間 06/21 19:28
4F：→ threestars:Nucleic Acid Res.(1991) 19: 4008 06/21 19:35
5F：推 sGoat:恩...我這樣說好了,touchdown會使用的主要因素是要提高正確 06/22 04:54
6F：→ sGoat:的產物在你PCR product的量,使得你的最終正確的PCR產物 06/22 04:55
7F：→ sGoat:能在產物中佔有最大量,因此他前面的cycle只是為了要放大 06/22 04:56
8F：→ sGoat:"正確"的template而已,因為那是1991的文章了PCR技術也進步 06/22 04:58
9F：→ sGoat:了許多,以現在的技術而言可能不再需要作那麼多的測試就可作 06/22 04:59
10F：→ sGoat:所以除非特殊因素,不然你可以做幾個溫度就試得出來了 06/22 05:02
11F：→ sGoat:前面四句在文章內有提到,而且65度以上的專一度已經夠了 06/22 05:04
12F：→ sGoat:除非你的primer設計不良,不然二級結構在此溫度都已經解開了 06/22 05:05