作者threestars (等待)
看板Biotech
标题Re: [求救] touchdown pcr
时间Mon Jun 16 14:53:48 2008
※ 引述《bbiioo (梅子)》之铭言：
: 想请问这个pcr
: 是什麽情况下可以使用
: 是 想要增加产物产量吗?
: 因为现在在进行的pcr
: 还在试他的最佳的Tm
: 老师是建议跑gradient
: 我是想说利用这个方法找
: 不知道可不可以
: 我是要从chromosome DNA 找出目标基因来
: 如果说用TOUCHDOWN这个方法
: 是每一个cycle降0.5度吧?
: 那范围怎麽设呢??
primer 黏合温度一开始比Tm值 高15~18度 每cycle降1度
直到温度到比Tm值低五到六度
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如果活在世上只是扮演着大家所期望的自己
那扮演好了又怎样
不如静静的让自己消失吧
总是多余的存在只是种荒谬的错误
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.223.228.164
1F：推 bbiioo:恩~我会试试的~~谢谢罗 06/16 20:32
2F：推 sGoat:这是gradient吧?touchdown是要减少非专一性结合,2个温差即可 06/20 17:27
3F：→ threestars:不对吧! touchdown是省找寻黏合温度的时间 06/21 19:28
4F：→ threestars:Nucleic Acid Res.(1991) 19: 4008 06/21 19:35
5F：推 sGoat:恩...我这样说好了,touchdown会使用的主要因素是要提高正确 06/22 04:54
6F：→ sGoat:的产物在你PCR product的量,使得你的最终正确的PCR产物 06/22 04:55
7F：→ sGoat:能在产物中占有最大量,因此他前面的cycle只是为了要放大 06/22 04:56
8F：→ sGoat:"正确"的template而已,因为那是1991的文章了PCR技术也进步 06/22 04:58
9F：→ sGoat:了许多,以现在的技术而言可能不再需要作那麽多的测试就可作 06/22 04:59
10F：→ sGoat:所以除非特殊因素,不然你可以做几个温度就试得出来了 06/22 05:02
11F：→ sGoat:前面四句在文章内有提到,而且65度以上的专一度已经够了 06/22 05:04
12F：→ sGoat:除非你的primer设计不良,不然二级结构在此温度都已经解开了 06/22 05:05