我在研究基因的轉錄調控 目前在transcriptional start site 上游約8.5K的地方 預測到一個 transcriptional factor 結合位置 已經用EMSA證明該序列會結合該factor(有super shift) 由於該序列為位在上游8.5k 因此要做reporter assay時 參照paper作法 會把該序列clone出來 當成enhancer來處理 clone到promoter之前或後 我是把該序列 約300bp 用PCR amplify 接到該gene之 minimal promoter之前 (pGL3-basic + minimal promoter + 300bp element) 但是 實驗結果 並沒有看到有作用 找了口試委員討論 他要我直接把300bp clone到pGL3-basic上 這讓我很困惑 pGL3-basic上面沒有 promoter 也沒有任何RNA polymerase 可以接合的序列 我的300bp序列中 也不含TATA or CCAAT box 這樣的luciferase costruct cotrasfected with/without receptor expresion plasmid 會看到作用嗎? 我把我的疑惑告訴老師 為什麼不是接到pGL3-promoter vector 而是pGL3-basic vector 他說 basic還是有很基本的活性，pGL3-promoter vector怕太強 induce之後可能也看不到) 想請教大家意見 因為我問到的人以及文獻都沒把enhancer直接clone到basic的 謝謝 -- im a good student --

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