作者bicon (不以物喜不以己悲)
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标题[讨论] enhancer接到 pGL3-basic vector
时间Wed Jun 11 21:50:33 2008
我在研究基因的转录调控
目前在transcriptional start site 上游约8.5K的地方
预测到一个 transcriptional factor 结合位置
已经用EMSA证明该序列会结合该factor(有super shift)
由於该序列为位在上游8.5k
因此要做reporter assay时 参照paper作法 会把该序列clone出来
当成enhancer来处理 clone到promoter之前或後
我是把该序列 约300bp 用PCR amplify 接到该gene之 minimal promoter之前
(pGL3-basic + minimal promoter + 300bp element)
但是 实验结果 并没有看到有作用
找了口试委员讨论 他要我直接把300bp clone到pGL3-basic上
这让我很困惑 pGL3-basic上面没有 promoter 也没有任何RNA polymerase
可以接合的序列
我的300bp序列中 也不含TATA or CCAAT box
这样的luciferase costruct cotrasfected with/without receptor expresion plasmid
会看到作用吗?
我把我的疑惑告诉老师 为什麽不是接到pGL3-promoter vector
而是pGL3-basic vector
他说 basic还是有很基本的活性，pGL3-promoter vector怕太强
induce之後可能也看不到)
想请教大家意见
因为我问到的人以及文献都没把enhancer直接clone到basic的
谢谢
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im a good student
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.7
1F：推 liuse:你可能要挑promoter不是很强的vector来做 不然真的会看不到 06/11 22:20
2F：→ liuse:enhancer effect 06/11 22:21
3F：推 Vickism:我单打只有130 bp的promoter进入胚胎只有约25%的表现 06/11 23:32
4F：→ Vickism:接上其他的element後，表现效率可到90%以上 06/11 23:33
5F：→ Vickism:所以我觉得你可以试试看只接basic的 看看结果如何~ 06/11 23:33