作者gwendiline (丹丹)
看板Biotech
標題[求救] 3'-RACE 一直smear....><
時間Sun Jun 8 21:40:18 2008
如標題所示....
3'-RACE 無論是重作3'-cDNA
或是重新設計primer
就是一直呈現smear狀態....
我已經把extension time加到4分鐘...
Tm目前是58度C
(沒辦法...我已經設計到極限了..天生序列的問題)
anealing temp 我從55降到50 仍然都一樣...
拜託...請有經驗的人幫幫我吧><
先前po過文了...
不見回應..~><~
我真的已經很認真做功課
primer 比對過了
也重新設計另外三組primer
PCR條件也慢慢修正
cDNA也已經重做三次
quality也都ok~(跑過膠片..)
但 結果都是一樣!!
拜託 大家 幫幫我吧><(跪求)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.192.30
1F：推 cow197:我現在也在做3'RACE 但我的問題跟你不一樣 你可以參考一下 06/12 21:33
2F：推 cow197:這篇paper 全名我忘了 Reduce extension temperature... 06/12 21:36
3F：→ cow197:他有一張圖顯示 降低extension temperature至60度 效果明 06/12 21:39
4F：→ cow197:顯改善 希望有幫助 06/12 21:41
5F：→ gwendiline:非常感謝您~~我會趕快下來看!!!:) 06/13 10:07