作者gwendiline (丹丹)
看板Biotech
标题[求救] 3'-RACE 一直smear....><
时间Sun Jun 8 21:40:18 2008
如标题所示....
3'-RACE 无论是重作3'-cDNA
或是重新设计primer
就是一直呈现smear状态....
我已经把extension time加到4分钟...
Tm目前是58度C
(没办法...我已经设计到极限了..天生序列的问题)
anealing temp 我从55降到50 仍然都一样...
拜托...请有经验的人帮帮我吧><
先前po过文了...
不见回应..~><~
我真的已经很认真做功课
primer 比对过了
也重新设计另外三组primer
PCR条件也慢慢修正
cDNA也已经重做三次
quality也都ok~(跑过胶片..)
但 结果都是一样!!
拜托 大家 帮帮我吧><(跪求)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.192.30
1F：推 cow197:我现在也在做3'RACE 但我的问题跟你不一样 你可以参考一下 06/12 21:33
2F：推 cow197:这篇paper 全名我忘了 Reduce extension temperature... 06/12 21:36
3F：→ cow197:他有一张图显示 降低extension temperature至60度 效果明 06/12 21:39
4F：→ cow197:显改善 希望有帮助 06/12 21:41
5F：→ gwendiline:非常感谢您~~我会赶快下来看!!!:) 06/13 10:07