作者kevinwyc (樂天 歡樂每一天)
看板Biotech
標題[求救] GST pull-down agarose
時間Sun Jun 8 01:52:23 2008
目前在作fusion protein 的蛋白和蛋白的交互作用
但是GST 和有fusion 蛋白的GST 都會抓到預期的蛋白
只是GST only的會比較少
學長建議也許可以在作fusion protein和 GST agarose 4B 作用完後用 BSA 或牛奶
去blocking
不過學長也沒做類似的實驗
請問學長這樣可行嗎 我問過其他作過此實驗的人 他們說並不需要這步
或者有啥其他的方法可以讓GST only的不抓到預期的蛋白
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◆ From: 163.25.93.225
※ 編輯: kevinwyc 來自: 163.25.93.225 (06/08 01:52)
1F：推 aggaci:應該是作用前做blocking吧，另外用高鹽buffer去洗應該有用 06/08 02:10
2F：推 blence:除非你的用量已經很少了,不然4B別太多,GSTs與target都先改 06/08 02:14
3F：→ blence:成1/2甚至1/4的用量,會比BSA有效(幾乎沒聽過這裡用milk的) 06/08 02:15
4F：→ blence:另外有人是step1用GST lysate而非purified與4B作用,而step2 06/08 02:16
5F：→ blence:才加purified target,這樣的話lysate也具有blocking效果 06/08 02:17