作者kevinwyc (乐天 欢乐每一天)
看板Biotech
标题[求救] GST pull-down agarose
时间Sun Jun 8 01:52:23 2008
目前在作fusion protein 的蛋白和蛋白的交互作用
但是GST 和有fusion 蛋白的GST 都会抓到预期的蛋白
只是GST only的会比较少
学长建议也许可以在作fusion protein和 GST agarose 4B 作用完後用 BSA 或牛奶
去blocking
不过学长也没做类似的实验
请问学长这样可行吗 我问过其他作过此实验的人 他们说并不需要这步
或者有啥其他的方法可以让GST only的不抓到预期的蛋白
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◆ From: 163.25.93.225
※ 编辑: kevinwyc 来自: 163.25.93.225 (06/08 01:52)
1F：推 aggaci:应该是作用前做blocking吧，另外用高盐buffer去洗应该有用 06/08 02:10
2F：推 blence:除非你的用量已经很少了,不然4B别太多,GSTs与target都先改 06/08 02:14
3F：→ blence:成1/2甚至1/4的用量,会比BSA有效(几乎没听过这里用milk的) 06/08 02:15
4F：→ blence:另外有人是step1用GST lysate而非purified与4B作用,而step2 06/08 02:16
5F：→ blence:才加purified target,这样的话lysate也具有blocking效果 06/08 02:17