作者der19 (褪色的愛情)
看板Biotech
標題[求救] E. coli BL21(DE3)pLysS Overexpression
時間Fri Jun 6 17:12:01 2008
請問有人有做過BL21(DE3)pLysS 的大量表現嗎?
目前因為我的蛋白質在BL21(DE3)表現會形成inclusion body
所以換成BL21(DE3)pLysS結果會由insoluble form 變成 soluble form
可是表現量大大降低
induction的condition如下:
500ml 菌量
37度C incubation到 O.D = 0.6-0.8
然後加IPTG 最後濃度1mM
接著
20度C/25度C incubation 16-18 hr
結果用 Ni-column 純化出來都只有 1-2 ml/mg 量太少了
請問有人可以改善這個問題嗎
因為我的蛋白質是要拿來結晶的
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.98.111
1F：推 alaric:考慮放大養菌量. 06/06 19:02
2F：推 wensing:你的質體是那個？ 做培養與誘導的最佳化 06/07 03:41
3F：→ der19:pET28a 06/07 23:24
4F：推 ROKEE:改host就可以收到soluble該偷笑了XDD 06/11 21:48