作者momolin1126 (阿毛)
看板Biotech
標題[求救]FITC的label方法
時間Tue Jun 3 16:52:12 2008
請問板上的各位大大們
FITC該怎麼正確地label上目標蛋白呢??
有什麼特定的Buffer環境嗎??
有些paper上有說不能用含有tris的Buffer不然FITC會跟tris反應鍵結
所以我是在二次水的環境下加入FITC分子跟目標蛋白
然後過濾掉沒label上的
可是將Sample跑膠結果卻無螢光反應 ><"
過濾後的sample中明明也有螢光反應
跑完膠卻消失了 染色後蛋白質也還在
有哪位大大可以指點一下嗎??
不知道是FITC分子沒有label上目標蛋白還是怎麼了....?
因為老師不喜歡用kit 所以是直接買FITC分子做的實驗
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◆ From: 140.130.189.49
1F：推 turtle24:FITC上有離去基嗎? 目標蛋白有可以被攻擊的地方嗎? 06/03 18:44
2F：→ turtle24:細部我都忘了..兩年前有看過學長label FITC.... 06/03 18:45
3F：推 runpapa0520:染蛋白不知 染菌的話要先用ACETONE 溶解，泡在PH 9 06/03 22:40
4F：→ runpapa0520:的0.1 M NaHCO3 染1h，之後再洗掉。 06/03 22:40
5F：→ qumai:我用水可以耶@@" 雖然沒純化 用質譜看是有加上去 06/03 23:13
6F：推 damnedest:FITC要在鹼性環境下作用 06/04 20:54
7F：→ momolin1126:謝謝大家的回答 我用各位說的Buffer環境試試看 06/06 22:00
8F：推 menadione123:買FITC-NHS ester與NH2直接反應 06/14 01:51