作者LIAR (墮天使)
看板Biotech
標題[閒聊] 有辦法代替trypsin inhibitor的步驟嗎？
時間Sat May 31 00:31:33 2008
我是wistar 7-day的小腦做神經培養，我們的protocol是這樣的
把分離的小腦剪碎到1mm左右，從dish移入50ml 離心管(此時體積8ml)
加入3.5% trypsin 1ml
│25 min
↓
加入3.5% trypsin inhibitor & DNAase 100ul
20 min
│
↓
離1500 rpm去上清液，重加kerb solution 10ml沖散過40 um filter
我們trypsin inhibitor剛用完，我準備要訂才發現5g大概要2萬多台幣，3.5%來用
1ml 就要$140，FBS $8000/500ml 也沒那麼貴。
時驗室其他小組說可以用血清或medium消減trypsin活性，但大家cell不同，trypsin
濃度也不一樣（我們的最濃），所以我想請問我們應該這麼做比較好，譬如說
1.trypsin 25min後直接離心重加kerb過40um，但我不曉得這時細胞受不受得了離心
和過濾的壓力。
2.medium直接同體積取代trypsin inhibitor，但濃度不曉得夠不夠。
3.FBS直接同體積取代trypsin inhibitor，問題同上。
或是從其他步驟著手，譬如trypsin降低之類的，可以請各位給我一點建議嗎？
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太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，
這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。
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◆ From: 123.192.40.98
1F：推 tsubasawolfy:我是覺得9ml medium(10% serum)作用幾分鐘後離心 05/31 08:09
2F：→ tsubasawolfy:1000以下rpm 4度C 3-5min應該就可以了 05/31 08:10
3F：推 tsubasawolfy:不過這濃度好高- -a 用FBS會不會變的黏黏稠稠的Orz? 05/31 08:14
4F：推 boblu:1.應該就可以了 離心跟過濾的壓力誰也說不準 05/31 10:45
5F：→ boblu:但是反正不管用不用 trypsin inhibitor 都有這個壓力在啊 05/31 10:45
6F：→ boblu:之後 primary culture 應該不會用 serium free 吧 05/31 10:46
7F：→ boblu:之後用的培養基裡面有血清就很夠抑制了 05/31 10:46
8F：→ LIAR:不...我壓力是指被trypsin作用後cell比較脆弱，經不住離心 05/31 23:07
9F：→ LIAR:和過濾，所以才猜原本inhibitor要放20min是否是為了恢復？ 05/31 23:08
10F：→ LIAR:請問tsubasawolfy指原本體積9ml，再加9ml的medium(10% FBS)嗎 05/31 23:09
11F：推 tsubasawolfy:恩 我是覺得因為你trypsin濃度好高才等體積加 06/01 20:06