作者LIAR (堕天使)
看板Biotech
标题[闲聊] 有办法代替trypsin inhibitor的步骤吗？
时间Sat May 31 00:31:33 2008
我是wistar 7-day的小脑做神经培养，我们的protocol是这样的
把分离的小脑剪碎到1mm左右，从dish移入50ml 离心管(此时体积8ml)
加入3.5% trypsin 1ml
│25 min
↓
加入3.5% trypsin inhibitor & DNAase 100ul
20 min
│
↓
离1500 rpm去上清液，重加kerb solution 10ml冲散过40 um filter
我们trypsin inhibitor刚用完，我准备要订才发现5g大概要2万多台币，3.5%来用
1ml 就要$140，FBS $8000/500ml 也没那麽贵。
时验室其他小组说可以用血清或medium消减trypsin活性，但大家cell不同，trypsin
浓度也不一样（我们的最浓），所以我想请问我们应该这麽做比较好，譬如说
1.trypsin 25min後直接离心重加kerb过40um，但我不晓得这时细胞受不受得了离心
和过滤的压力。
2.medium直接同体积取代trypsin inhibitor，但浓度不晓得够不够。
3.FBS直接同体积取代trypsin inhibitor，问题同上。
或是从其他步骤着手，譬如trypsin降低之类的，可以请各位给我一点建议吗？
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太初有道，道与耶和华同在，道就是耶和华。这道太初与耶和华同在。
万物乃藉祂所造，凡被造的没有一样不是藉着祂所造的。生命在祂里头，
这生命就是人的光。光照在黑暗里，黑暗却不接受光。
吾辈乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦诱惑，回归黑暗。
我不断地徘徊於光明与黑暗之间，从被造之日至今，又自今直到那审判之日的来临。
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◆ From: 123.192.40.98
1F：推 tsubasawolfy:我是觉得9ml medium(10% serum)作用几分钟後离心 05/31 08:09
2F：→ tsubasawolfy:1000以下rpm 4度C 3-5min应该就可以了 05/31 08:10
3F：推 tsubasawolfy:不过这浓度好高- -a 用FBS会不会变的黏黏稠稠的Orz? 05/31 08:14
4F：推 boblu:1.应该就可以了 离心跟过滤的压力谁也说不准 05/31 10:45
5F：→ boblu:但是反正不管用不用 trypsin inhibitor 都有这个压力在啊 05/31 10:45
6F：→ boblu:之後 primary culture 应该不会用 serium free 吧 05/31 10:46
7F：→ boblu:之後用的培养基里面有血清就很够抑制了 05/31 10:46
8F：→ LIAR:不...我压力是指被trypsin作用後cell比较脆弱，经不住离心 05/31 23:07
9F：→ LIAR:和过滤，所以才猜原本inhibitor要放20min是否是为了恢复？ 05/31 23:08
10F：→ LIAR:请问tsubasawolfy指原本体积9ml，再加9ml的medium(10% FBS)吗 05/31 23:09
11F：推 tsubasawolfy:恩 我是觉得因为你trypsin浓度好高才等体积加 06/01 20:06