作者ERTY37 (俊)
看板Biotech
標題[求救] 染色體抽取問題
時間Tue May 27 16:01:20 2008
1. 首先我將培養好了菌液(Pseudomonas Stutzeri)拿去離心10分鐘,得到菌塊
2. 接者加入溶菌溶液(lysozyme NaCl EDTA 在PH=8),均勻混和後放入37℃ 30分鐘 ,然
後放入 -20℃直至結凍
3. 接者加入變性容易(SDS NaCl Tris-HCl)混合均勻
4. 再加入飽和酚混合均勻 ,離心5分鐘
5. 取上清液(若取300ul)移至新的微離心管 , 加入 600 ul 95% 的乙醇 ,混合均勻 ,放
在 -70℃下 1-2 小時
6. 離心5分鐘
7. 倒掉溶液 放入真空烘箱
8. 等出現白色或透明乾燥物 , 加入 50ul的DI水 , 即可當PCR (template) 染色體溶液
9. 接者把此染色體之溶液 , 去跑DNA電泳
問題就是 照理來說跑出來的圖應該是從上往下拖 , 而我跑出來的圖都是從下往上拖
這是為什麼啊??抽染色體的步驟有錯嗎??還是有哪些地方是需要注意的啊??
有人做過一樣的嗎??
p.s 最右邊是marker 最大的band為10000bp 最小的band為250bp
圖:
http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/2526569369/
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◆ From: 140.123.127.42
1F：推 yaliu:怎麼感覺很像斷光了？ 最上面應該要有一條明顯的band吧？ 05/27 20:46
2F：推 belady:如果只是單純要做PCR的話 直接用colony PCR就好啦 05/28 21:03
3F：→ belady:加上你的樣本是陰性菌 細胞壁很好破 (我的是P. aeruginosa) 05/28 21:04
4F：推 nutahoshi:你電泳跑多久阿.第一直覺是你的sample跳海了 06/12 05:58