作者ERTY37 (俊)
看板Biotech
标题[求救] 染色体抽取问题
时间Tue May 27 16:01:20 2008
1. 首先我将培养好了菌液(Pseudomonas Stutzeri)拿去离心10分钟,得到菌块
2. 接者加入溶菌溶液(lysozyme NaCl EDTA 在PH=8),均匀混和後放入37℃ 30分钟 ,然
後放入 -20℃直至结冻
3. 接者加入变性容易(SDS NaCl Tris-HCl)混合均匀
4. 再加入饱和酚混合均匀 ,离心5分钟
5. 取上清液(若取300ul)移至新的微离心管 , 加入 600 ul 95% 的乙醇 ,混合均匀 ,放
在 -70℃下 1-2 小时
6. 离心5分钟
7. 倒掉溶液 放入真空烘箱
8. 等出现白色或透明乾燥物 , 加入 50ul的DI水 , 即可当PCR (template) 染色体溶液
9. 接者把此染色体之溶液 , 去跑DNA电泳
问题就是 照理来说跑出来的图应该是从上往下拖 , 而我跑出来的图都是从下往上拖
这是为什麽啊??抽染色体的步骤有错吗??还是有哪些地方是需要注意的啊??
有人做过一样的吗??
p.s 最右边是marker 最大的band为10000bp 最小的band为250bp
图:
http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/2526569369/
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.127.42
1F：推 yaliu:怎麽感觉很像断光了？ 最上面应该要有一条明显的band吧？ 05/27 20:46
2F：推 belady:如果只是单纯要做PCR的话 直接用colony PCR就好啦 05/28 21:03
3F：→ belady:加上你的样本是阴性菌 细胞壁很好破 (我的是P. aeruginosa) 05/28 21:04
4F：推 nutahoshi:你电泳跑多久阿.第一直觉是你的sample跳海了 06/12 05:58