作者STEVENUA (笑點人)
看板Biotech
標題[求救] 關於sonication的小問題…
時間Sat May 17 18:43:29 2008
我想請教各位先進，有關於sonication的一些小問題。
我要純化出來的蛋白質是一個pilin，就之前用少量去做發現他在sonication後是soluble
和pellet form都有這個蛋白質在，就很開心的放大量的去跑。
結果SDSPAGE出來我要的蛋白質沒有出現在supernatant中…
小量的我是用
on 1s Amp 30% 菌液量是4ml濃縮成600 ul
off 1s time 1min temperature：4度C
共打兩次，每次間沒有停，這樣子有做出來，而且是很明顯的soluble form有。
大量的菌液量是200ml濃縮成20ml, sonication的PROGRAM同上跑過一次，只是SONICATION
的次數共打三次
這樣子沒有跑出我要的東西
想請教一下各位應該要如何改進?我想到的是增加SONICATION的次數和縮小體積(將20ml的
菌液分成多管eppendorf去打)
增加的話要增加次數到什麼樣子呢?縮小體積又最好是多少一管呢ꄊ
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◆ From: 140.113.242.8
1F：推 differkb:你確定超音波破菌過程會影響蛋白溶解度嗎？ 05/17 19:07
2F：→ STEVENUA:如果沒有破菌完全會留在菌塊中～ 05/17 20:58
3F：推 CErline:看起來是破菌沒破完全，sonicator小量可，放大能量不足 05/17 21:33
4F：推 differkb:其實 你將破菌後的液體 放久一點 有菌體的話 他會沈澱 05/18 19:46
5F：→ differkb:如果可以的話 是可以取上清液 下方液體是可以再補一點 05/18 19:46
6F：→ differkb:破菌 buffer 然後 再打久一點 注意要維持低溫 05/18 19:47