作者STEVENUA (笑点人)
看板Biotech
标题[求救] 关於sonication的小问题…
时间Sat May 17 18:43:29 2008
我想请教各位先进，有关於sonication的一些小问题。
我要纯化出来的蛋白质是一个pilin，就之前用少量去做发现他在sonication後是soluble
和pellet form都有这个蛋白质在，就很开心的放大量的去跑。
结果SDSPAGE出来我要的蛋白质没有出现在supernatant中…
小量的我是用
on 1s Amp 30% 菌液量是4ml浓缩成600 ul
off 1s time 1min temperature：4度C
共打两次，每次间没有停，这样子有做出来，而且是很明显的soluble form有。
大量的菌液量是200ml浓缩成20ml, sonication的PROGRAM同上跑过一次，只是SONICATION
的次数共打三次
这样子没有跑出我要的东西
想请教一下各位应该要如何改进?我想到的是增加SONICATION的次数和缩小体积(将20ml的
菌液分成多管eppendorf去打)
增加的话要增加次数到什麽样子呢?缩小体积又最好是多少一管呢ꄊ
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.242.8
1F：推 differkb:你确定超音波破菌过程会影响蛋白溶解度吗？ 05/17 19:07
2F：→ STEVENUA:如果没有破菌完全会留在菌块中～ 05/17 20:58
3F：推 CErline:看起来是破菌没破完全，sonicator小量可，放大能量不足 05/17 21:33
4F：推 differkb:其实 你将破菌後的液体 放久一点 有菌体的话 他会沈淀 05/18 19:46
5F：→ differkb:如果可以的话 是可以取上清液 下方液体是可以再补一点 05/18 19:46
6F：→ differkb:破菌 buffer 然後 再打久一点 注意要维持低温 05/18 19:47