※ 引述《nk12914 (尋找)》之銘言： : 最近在做induction實驗 : 用的是pET23a vector : host用過BL21(DE3)跟pLysE兩種 : IPTG final濃度是1mM : induction條件是37度C或30度C 三個小時 (五個小時也有try過) : protein size大約47kD : 可是每次做出來的結果都是 : 沒有加IPTG的 BAND的強度都比有加IPTG來的強 : 加了IPTG整條lane的band都變弱了 : 而且看起來好像是沒有induction出來 : 因為沒有很明顯粗粗的一條band : 推測的size 附近確實也有band : 可是就像上面說的結果 不管是空的host(沒送plasmid) 或是沒有induction的 : 都比有induction的BAND來的強 : 已經試過很多次都是這樣了 : 實在不知道是哪裡出了問題 : 可以請大家給我一些建議嗎? : 謝謝大家 insert真的有送進去嗎？ 之前我是用pET30b vector，host是用BL21(DE3)和pLysS兩種， 那時IPTG induction條件也試了很多個（溫度、時間、濃度） 但是induction後的band只有弱弱的一條， 沒加IPTG或空的host是根本不會有那個band。 我有送定序，確定我要的東西有接進去， 後來改以pET21b當vector，送BL21(DE3)，就有粗粗的一條band了。 我後來用的條件都是25度C 5hr～ -- ⊥ ‧ 日 ┌┬┐ ┴ □┼─ ┬ ├┼┤ ┴┴ ┌┼┐ ├ ┌─－　 小┘∟ /├ └┼┘ 曰 ∣┴ －┼－├─┐ 　　　 ¯ ∣ / ∟〢∣╳ ├ ┴─┴ --

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