※ 引述《nk12914 (寻找)》之铭言： : 最近在做induction实验 : 用的是pET23a vector : host用过BL21(DE3)跟pLysE两种 : IPTG final浓度是1mM : induction条件是37度C或30度C 三个小时 (五个小时也有try过) : protein size大约47kD : 可是每次做出来的结果都是 : 没有加IPTG的 BAND的强度都比有加IPTG来的强 : 加了IPTG整条lane的band都变弱了 : 而且看起来好像是没有induction出来 : 因为没有很明显粗粗的一条band : 推测的size 附近确实也有band : 可是就像上面说的结果 不管是空的host(没送plasmid) 或是没有induction的 : 都比有induction的BAND来的强 : 已经试过很多次都是这样了 : 实在不知道是哪里出了问题 : 可以请大家给我一些建议吗? : 谢谢大家 insert真的有送进去吗？ 之前我是用pET30b vector，host是用BL21(DE3)和pLysS两种， 那时IPTG induction条件也试了很多个（温度、时间、浓度） 但是induction後的band只有弱弱的一条， 没加IPTG或空的host是根本不会有那个band。 我有送定序，确定我要的东西有接进去， 後来改以pET21b当vector，送BL21(DE3)，就有粗粗的一条band了。 我後来用的条件都是25度C 5hr～ -- ⊥ ‧ 日 ┌┬┐ ┴ □┼─ ┬ ├┼┤ ┴┴ ┌┼┐ ├ ┌─－　 小┘∟ /├ └┼┘ 曰 ∣┴ －┼－├─┐ 　　　 ¯ ∣ / ∟〢∣╳ ├ ┴─┴ --

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