作者nk12914 (尋找)
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標題[求救] protein induction的結果一直很奇怪
時間Fri May 16 15:39:56 2008
最近在做induction實驗
用的是pET23a vector
host用過BL21(DE3)跟pLysE兩種
IPTG final濃度是1mM
induction條件是37度C或30度C 三個小時 (五個小時也有try過)
protein size大約47kD
可是每次做出來的結果都是
沒有加IPTG的 BAND的強度都比有加IPTG來的強
加了IPTG整條lane的band都變弱了
而且看起來好像是沒有induction出來
因為沒有很明顯粗粗的一條band
推測的size 附近確實也有band
可是就像上面說的結果 不管是空的host(沒送plasmid) 或是沒有induction的
都比有induction的BAND來的強
已經試過很多次都是這樣了
實在不知道是哪裡出了問題
可以請大家給我一些建議嗎?
謝謝大家
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.129
1F：推 simonmiho:1.IPTG 降至0.1mM(做dose dependent看看，可能蛋白有毒 05/16 16:33
2F：→ simonmiho:2.用pLys 表現看看是不是蛋白leakage對BL21有無毒性.. 05/16 16:35
3F：→ nk12914:請問蛋白有毒與否 可以從那些方面看的出來呢?我induction 05/16 16:36
4F：→ nk12914:的protein 是屬於lectin的一種protein 05/16 16:37
5F：推 simonmiho:看paper protein有無antibacterial activity.. 05/16 16:40
6F：推 aggaci:protein是soluble form就有做的價值 05/29 00:27