作者nk12914 (寻找)
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标题[求救] protein induction的结果一直很奇怪
时间Fri May 16 15:39:56 2008
最近在做induction实验
用的是pET23a vector
host用过BL21(DE3)跟pLysE两种
IPTG final浓度是1mM
induction条件是37度C或30度C 三个小时 (五个小时也有try过)
protein size大约47kD
可是每次做出来的结果都是
没有加IPTG的 BAND的强度都比有加IPTG来的强
加了IPTG整条lane的band都变弱了
而且看起来好像是没有induction出来
因为没有很明显粗粗的一条band
推测的size 附近确实也有band
可是就像上面说的结果 不管是空的host(没送plasmid) 或是没有induction的
都比有induction的BAND来的强
已经试过很多次都是这样了
实在不知道是哪里出了问题
可以请大家给我一些建议吗?
谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.129
1F：推 simonmiho:1.IPTG 降至0.1mM(做dose dependent看看，可能蛋白有毒 05/16 16:33
2F：→ simonmiho:2.用pLys 表现看看是不是蛋白leakage对BL21有无毒性.. 05/16 16:35
3F：→ nk12914:请问蛋白有毒与否 可以从那些方面看的出来呢?我induction 05/16 16:36
4F：→ nk12914:的protein 是属於lectin的一种protein 05/16 16:37
5F：推 simonmiho:看paper protein有无antibacterial activity.. 05/16 16:40
6F：推 aggaci:protein是soluble form就有做的价值 05/29 00:27