作者voen (新的開始~加油吧)
看板Biotech
標題[求救] 限制酶截切沒有band
時間Fri May 9 22:57:26 2008
想請教各位
我把欲cloned的基因和pET21a進行ligation
隔天挑點作colony PCR
有出現目標band
再將那些點養菌抽質體
可是之後進行限制酶作用 卻都沒有出現我要的band
做了三次都出現這個問題
不知道該怎麼辦 0rz
請教各位了 謝謝回答 <(_ _)>
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不要小看自己
因人有無限可能
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.234.138
1F：推 frandt:可以試看看直接取colony做PCR看P不P得出來 05/09 23:31
2F：推 dankai:拿酵素去切其他DNA 看能不能切 05/09 23:39
3F：推 chvkimo:樓上 應該是要測試你的enzyme有沒有壞掉 right? 05/10 22:20
4F：推 yaliu:如果enzyme沒壞，可是又切不出來...會不會其實你P出來不是 05/11 01:34
5F：→ yaliu:你想的目標基因....只是恰巧被你的primer P到而已.... 05/11 01:34
6F：→ ppppai:有查NEB看你的限制酶有無特殊note? 05/14 17:05
7F：→ ppppai:之前我有切不動的情形是因為plasmidDNA在細菌中太舊才抽出 05/14 17:05
8F：→ ppppai:導致可能被甲基化，所以切不動，再把DNA重新transform重抽 05/14 17:06
9F：→ ppppai:就不會了 05/14 17:06
10F：→ ppppai: 久 (錯字) 05/14 17:07
11F：→ ppppai:注: 太久= transform菌養2ml離心後直接凍-20超過一個月後抽 05/14 17:09